DETECTEM LA PRESÈNCIA I L'ABSÈNCIA DE GLUTEN ALS ALIMENTS
Avui dissabte hem utilitzat dos models d'anàlisi de gluten en els aliments. El primer no és real ja que el sistema d'electroforesi que tenim amb agarosa, no és útil per utilitzar-lo amb proteïnes ja que s'utilitza ADN, però ens serveix per fer una simulació de la realitat.
Pel que respecta al segon mètode, hem fet servir un quit d'anàlisi proporcionat per l'empresa Nirco, S.L. que es dedica al diagnòstic i a la recerca mèdica.
Ara us explicarem els materials i el procediment que hem seguit, acompanyat d'algunes imatges.
QUIT D'ELECTROFORESI
Materials utilitzats:
| 1g d'agarosa | 10 ml de TAE 50x | 1 Erlenmeyer de 100 ml |
| 1 Recipient de 100 ml | Regle | Microones / Placa calenta |
| 2 papers de carbó de 4 cm x 1.5 cm | 500 ml d'aigua destil·lada | 2 Cables elèctrics: 1 negre i 1 vermell |
| 3 piles de 9V | 1 Xeringa | 4 micropipetes de 10 microL |
| 3 tubs de colorants alimentaris | 2 làmines de papers A5, 1 blanca i 1 negra | 1 pinta amb 6 forats |
 |
| Materials utilitzats per fer l'electroforesi en agarosa |
Procediment i resultats:
En primer lloc hem fet la preparació de la dissolució de 10ml TAE en 490ml d'aigua destil·lada. Seguidament hem posat la pinta dins la capsa. Hem col·locat la làmina de color negre sota la capsa perquè així es pugués visualitzar millor el contrast entre el gel i els colorants.
 |
| Moment d'escalfament |
Per poder preparar aquest 1% de gel d'agarosa hem mesurat 1g d'agarosa i l'hem barrejat amb els 100ml de TAE 1x. Aquesta mescla l'hem escalfat en una placa calenta fins que la dissolució quedés transparent. Un fet a tenir en compte per la propera vegada és d'escalfar prèviament la placa perquè el procés d'escalfament sigui més ràpid.
A la capsa hem introduït la dissolució, tot i que no fins a dalt de tot, deixant uns mil·límetres a la part superior. Al cap d'uns 10 minuts, el gel ha passat a ser sòlid com una gelatina, i d'un color més opac.
Amb un regle hem fet un tall just pels laterals de la capsa amb el gel per poder introduir el paper de carbó i així pogués fer de connector, com si fossin els dos pols.
 |
 |
|
| Capsa amb la pinta i la mescla d'agarosa i TAE x1, mentre s'estava solidificant |
Tallant amb un regle els extrems de la columna d'agarosa |
Posant els papers de carbó als forats |
Posteriorment, hem posat 1x TAE per sobre la solució per cobrir-la i seguidament hem tret la pinta, que ha deixat 6 petites obertures, on hi posarem les diferents barreges. aquestes s'han fet amb colorants alimentaris:
- Blau: representaria la mostra control de gluten.
- Groc: un aliment sense gluten.
- Vermell: un aliment sense gluten.
- Blau-Groc-Vermell: un aliment amb gluten.
- Groc-Vermell: un aliment sense gluten.
 |
| Muntatge del circuit amb les piles i la capsa amb els colorants |
Per aconseguir un corrent elèctric sobre la superfície, hem conectat 5 piles de 9V en sèrie. Un extrem dels cables a la pila i l'altre al paper de carbó tal i com estava indicat a les instruccions. Es va produir un corrent elèctric i això ho vam poder observar ja que on hi havia el paper de carbó, començaven a aparèixer petites bombolles.
Al cap d'una estona les barreges dels colorants es van començar a desplaçar-se cap al pol oposat i es van començar a separar a separar els diferents colorants fins arribar a l'altre extrem.
Hem observat com el color blau (representava gluten pur), que seria el més pesat, ha quedat cap a l'inici de la capsa i casi que no s'ha mogut. El colorant vermell ha quedat entremig i el groc, que és el més lleuger ha arribat fins a l'altre pol. A les barreges, els colors primaris s'han separat i s'ha pogut observar que una de les barreges, amb color blau, representaria l'aliment amb gluten, mentre que l'altra barreja, no.
|
|
| Inici del procés d'electroforesi | Resultat definitiu de l'electroforesi en agarosa |
 |
| Les barreges de colorants i el resultat final |
QUIT DE GLUTENTOX STICKS
Una mica de teoria:
És una prova immunocromatogràfica ràpida que permet la detecció semiquantitativa de gluten immunotòxid que perjudica als celíacs en aliments i superfícies.
En l'actualitat, l'únic tractament del que disposen les persones que pateixen aquesta malaltia, és seguir una dieta estricta sense gluten durant tota la seva vida, un fet que presenta grans dificultats a la pràctica , sobretot si tenim en comte que el gluten, a més d'estar present en multitud d'aliments, ho està també en additius i conservants.
Per considerar un aliment "sense gluten" ha de tenir un contingut de gluten inferior a 20 parts per milió (ppm). Serà considerat com aliment amb un baix nivell de gluten si poseeix menys de 100 ppm.
Durant la proba, la mostra reacciona amb els conjugats vermells (anticossos anti-gliadina33mer) prèviament fixats en el test. Aquest complex avança per capilaritat al llarg de la tira. Per indicar que el resultat és positiu, una línia de color VERMELL apareixerà a la zona de resultats de la membrana de la tira. L'absència d'aquesta línia indica un resultat negatiu. Independentment que hi hagi presència o no de gluten, la mescla realitzada va avançant fins a la regió de control, on s'han inmovilitzat anticossos que han d'atrapar als conjugats blaus, si el test s'ha realitzat correctament haurà d'aparèixer una línia de color BLAU (línia de control).
L'aparició d'aquesta línia s'utilitza per:
- Verificar que s'ha afegit el volum de mostra suficient.
- Indicar que el fluxe ha sigut l'apropiat.
- Com a control intern dels reactius. Si la línia és BLAVA no apareix, el test s'ha de considerar invàlid.
Materials utilitzats:
| GlutenTox Sticks (25 tires) | Solució d'Extracció (Etanol 60%, 250ml) | Solució en Dilució (30ml) |
| Control Positiu (farina de blat: 1g) | Control Negatiu (farina de blat de moro: 1g) | Tires multipouets (4tires x 8 pouets) |
| Tubs d'assaig | Balança analítica (de precisió 0,1g) | Vials d'assaig |
| Pipetes i puntes | Aigua destil·lada | Cronòmetre |
 |
| Materials utilitzats per a aquest anàlisi de la concentració de gluten en aliments |
Procediment:
 |
| Moment del pesatge de la mostra |
Primer de tot s'ha de triturar bé la massa si és sòlida i seguidament, com que és farina l'aliment que nosaltres hem utitlizat, l'hem pesat directament, per tenir 1g.
Li hem afegit 10ml de Solució d'Extracció i ho hem barrejat bé perquè quedés homogeni. Llavors hem estat uns 15 minuts remenant el líquid.
Seguidament hem introduït 1ml d'aquesta mostra a un tub d'assaig i l'hem passat amb l'ajuda d'una mircopipeta al potet per les mostres diluïda. Llavors hem agafat una de les tires i l'hem posat verticalment dins, i al cap d'uns 10 minuts ja hem obtingut resultats.
 |
 |
| Mesurant la mostra diluïda per analitzar-la | Resultat de l'anàlisi. Esquerra: mostra amb gluten (línies blava i vermella). Dreta: mostra sense gluten (només línia blava) |
Cap comentari:
Publica un comentari a l'entrada